案例說明

適用于黃連配方顆粒中生物堿（表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和鹽酸小檗堿）的含量測定。

黃連配方顆粒試樣經(jīng)甲醇-鹽酸溶液超聲提取后，使用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，在等度條件下進行分離，鹽酸小檗堿在345nm處有紫外吸收，采用一測多評的方式進行定量。

分析條件

色譜柱：Kromasil 100-5-C18，4.6x250mm （訂貨號：M05CLA25）

流動相：（A）乙腈        （B）0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（50:50）（每100mL中加十二烷基硫酸鈉0.4g，再以磷酸調(diào)節(jié)pH值為4.0）

流速：1.0mL/min

進樣量：10μL

柱溫：30℃

波長：345nm

分析圖譜

3.1

按照上述色譜條件（5.2）進行采集，鹽酸小檗堿對照品溶液（濃度為81.853

μg/mL）的色譜圖如圖1所示，積分結(jié)果如表1所示。

表1鹽酸小檗堿對照品溶液色譜圖積分結(jié)果

由表1中可知，鹽酸小檗堿的理論塔板數(shù)為14933，滿足《黃連（黃連）配方顆?！分宣}酸小檗堿峰的理論塔板數(shù)不低于5000的要求。

將鹽酸小檗堿對照品溶液連續(xù)進樣7針，疊加的色譜圖如圖2所示，結(jié)果見表2。

表2鹽酸小檗堿對照品溶液連續(xù)進樣7針重復(fù)性數(shù)據(jù)統(tǒng)計

鹽酸小檗堿對照品溶液連續(xù)進樣7針重復(fù)性測試，保留時間的RSD為0.016%，峰面積的RSD為0.524%

3.2 含量測定:

3.2.1 校準(zhǔn)曲線

將配制好的鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.9）在HPLC上進行測定，以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線，線性方程及相關(guān)系數(shù)見圖4，疊加色譜圖見圖5。小檗堿在測定濃度范圍內(nèi)，曲線的相關(guān)系數(shù)R2達到0.9995，線性關(guān)系良好。

3.2.2 含量計算

購買黃連配方顆粒作為樣品，按照5.1的流程對樣品進行處理，并根據(jù)樣品的含量，對樣品進行加標(biāo)回收實驗。按照公式（1）進行計算，樣品的色譜圖及樣品加標(biāo)的色譜圖如圖6及圖7。

      ----公式（1）

式中：

ω-----為樣品中小檗堿的含量，單位為毫克每克（mg/g）；

C----為通過校準(zhǔn)曲線計算的樣品中小檗堿濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V----為樣品的定容體積，單位為毫升（mL）；

m----為樣品質(zhì)量，單位為克（g）。

樣品中表小檗堿、黃連堿、巴馬汀的定量采用一測多評的方式，用對照品鹽酸小檗堿的含量進行定量，計算系數(shù)為1。表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿的峰位，利用待測成分色譜峰與鹽酸小檗堿色譜峰的相對保留時間進行確定，實測以上四種物質(zhì)的相對保留時間見表4。

表4待測成分的相對保留時間

由表4可以看出，四種物質(zhì)的相對保留時間均在標(biāo)準(zhǔn)要求的±5%之內(nèi)。

經(jīng)計算，此黃連配方顆粒樣品中小檗堿的含量為140.8mg/g，加標(biāo)回收率為102.7%，表小檗堿、黃連堿、巴馬汀的總量為102.2mg/g。

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